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植物乳杆菌(HCS03-002)通便功效试验

益生菌是一类对宿主有益的活性微生物,其能够粘附于肠道中,通过短暂的定植促进肠道内微生态平衡,促进有益菌增殖、抑制有害菌生长、增强机体免疫力、促进营养物质消化吸收.小儿便秘是一种常见临床消化道疾病,多因饮食不当,过多食入辛、辣、油腻食物或过多食用少渣精细食物,导致肠道干涩,蠕动减慢从而导致便秘.这种便秘多为功能性便秘,少见病理性便秘,其根本原因为肠道微环境失调所导致.本研究针对功能性便秘这种特定症状作为研究方向,应用盐酸洛哌丁胺作为造模药物建立肠蠕动抑制模型,考察汉臣氏(沈阳)儿童制品有限公司自主分离的菌株植物乳杆菌HCS03-002的通便益生特性,为今后该菌株的后续开发、生产提供数据支持.

材料与方法

实验动物.昆明(KM)小鼠,18~22g,4~5周龄,50只,雄性.购于辽宁长生生物技术股份有限公司,许可证号:SCXK(辽)2015-0001.

菌种.汉臣氏(沈阳)儿童制品有限公司分离的植物乳杆菌HCS03-002,实验室保存.

试剂及仪器.盐酸洛哌丁胺、活性炭粉、阿拉伯树胶、天平、注射器、直尺、眼科镊、手术剪.

实验方法.

(1)实验动物分组样品给予时间 实验设三个剂量组,一个空白对照组和一个模型对照组.空白对照组和模型对照组同途径给蒸馏水.

样品给予时间21天.分组及给样方案详见表1.

(2)实验步骤 墨汁配制:准确称取阿拉伯树胶100g,加水800ml,煮沸至溶液透明,再称取活性炭粉50g加至上述溶液中煮沸3次,待溶液凉后加水定容到1000ml,于冰箱中4℃保存,用前摇匀.

盐酸洛哌丁胺溶液(0.8mg/ml)配制:准确称取盐酸洛哌丁胺16mg,加入20ml蒸馏水充分溶解,现用现配.

模型建立:小鼠平衡饲养3天后,按体重随机分组,连续给样品21天后,各组小鼠禁食不禁水16h.模型对照组和三个剂量组给予盐酸洛哌丁胺(8mg/kg),空白对照组给蒸馏水.

指标测定:给盐酸洛哌丁胺后0.5小时,剂量组分别灌胃给予含受试样品的墨汁,空白和模型对照组灌胃墨汁;25分钟后立即脱颈椎处死动物,从幽门至墨汁前沿为“墨汁推进长度”.按下式计算墨汁推进率:

数据处理及结果判定:应用SPSS软件的单因素分析方法(One-Way-Anova)对墨汁推进率进行组间统计学比较.

结果

墨汁推进率.根据各组实验动物墨汁推进率(表2)可知:本次试验模型对照组墨汁推进率(49%)低于空白对照组(73%),本次试验造模成功;通过组间统计学分析,植物乳杆菌3g/kg组(63%)与模型对照组(49%)比较,有显著性差异.

实验过程中,模型对照组墨汁推进率明显低于空白对照组,说明本方案造模方法是可行的,能够实现肠蠕动的抑制.各给样组均表现出有一定的通便功效,1g/kg、2g/kg、3g/kg剂量组墨汁推进率分别为55%、61%、63%,均高于模型对照组(49%),但未表现出明显的剂量依赖关系;这种现象说明植物乳杆菌可能在1g/kg剂量下已经达到最大肠道定植效果,提高给样剂量如2g/kg及3g/kg无法继续放大通便效果;这种现象也有可能是因为给样周期短导致的,在后续的实验中,在保留现有方案下,可以通过增加其他剂量组或调整给样周期来进行改进,以期达到最优试验效果,从表观水平上,进一步评价植物乳杆菌(HCS03-002)的小鼠体内通便效果.综上,在3g/kg剂量下,连续21天口服灌胃植物乳杆菌(HCS03-002),对小鼠肠蠕动抑制模型有较好的通便效果;同时说明,本公司植物乳杆菌(HCS03-002),具有一定的开发潜力.

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