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数字PCR在食品检测中的应用进展
摘 要：近几年,食品安全问题受到社会及国家的高度重视,为人们提供健康、安全的食品因此成为各企业及单位的重要研究内容.数字PCR技术的出现为食品检测提供了便利条件,切实提高了检测效率,满足了食品检测准确度的要求,降低了食源性感染率.
关键词：数字PCR；食品检测；食品安全
数字PCR打破传统的食品检测技术,不受扩增效率约束、无需使用内参基因与标准曲线,检测准确度高,并且具有较强的灵敏性、耐受性和绝对定量的优势.现如今,数字PCR技术已经得到了广泛应用,未来发展前景非常广阔.
一、数字PCR技术概述
数字PCR技术标准应用过程为：首先,稀释核酸模板并分配至独立的反应单元,各反应单元对应DNA模板分子；其次,对反应单元展开PCR扩增反应,完成后统计荧光信号；最后,结合荧光信号阳性的反应单元占据比重,推算核酸序列拷贝数.现阶段,数字PCR可以分为微滴式数字PCR与芯片式数字PCR.前者是将各样本的反应液分成若干乳液包裹的微液滴,不同微滴内展开PCR扩增反应从而检测荧光信号,结合占据比重检测目的序列含量；后者则是利用微流控技术导入芯片上的反应仓进行PCR反应,根据相近的基因芯片方法检测各反应仓的荧光信号,推算出目的序列含量.现阶段,两种检测模式都可以达到对样品分配至20000个以上独立的PCR反应,符合样品精准定量要求.
二、数字PCR对食源性病原体的检测
传统微生物对食源性病原体的检测时间长、操作复杂、检出限高,难以培养致病病原体.由于数字PCR技术有着效率高、灵敏性强、精准的特点,将其应用在食品检测中可以迅速确定食源性病原体.调查显示,常见食源性致病体包括食源性病毒和细菌性肠道致病菌,细菌性肠道致病菌又分为沙门氏菌、金葡萄球菌、李斯特菌等多种.经过食品传播的食源性病毒分为轮状病毒、甲肝病毒、诺如病毒.近几年,病毒性腹泻患病率逐年提高,特别是诺如病毒给人们的身体健康带来严重影响.应用数字PCR技术进行食源性病原体检测,对荧光定量PCR与数字PCR比较,数字PCR有着高灵敏性、培育时间短、抗性强的优势,检测结果准确、稳定,达到绝对定量.数字PCR技术抵抗性较强,是高通量筛选微生物判断食品安全的有效方法,现已应用到乳制品检测中.
三、数字PCR技术对
转基因食品与食品源成本的检测数字PCR在转基因食品检测中的应用主要集中于转基因大豆与玉米.有学者对不同大豆性状位点转基因株系研发了不同检测数字PCR方案,对两种转基因大豆加标样品采用数字PCR技术定量研究,结果显示：数字PCR技术能够对0.001％加标DNA样品准确定量分析.通过数字PCR检测两种转基因玉米基因拷贝的绝对数量,双重数字PCR检测灵敏性与单独数字PCR灵敏性相近.对转基因玉米品系研发两个独立的多重数字PCR方案,能够一次检验12个转基因玉米基因拷贝数.现阶段,PCR技术应用于转基因食品检测已经成为研究的重要课题.
目前,一些企业为节约成本而使用劣质原料,严重威胁人们的身体健康,应用数字PCR技术则可以迅速、精准的进行食品检测.数字PCR技术不受标准曲线、参照样本控制,能够直接检测样品目标基因的绝对拷贝数,未来发展潜力较大.除了鸡肉、猪肉、羊肉等动物源食品,数字PCR技术也可以应用于植物源食品检测,如：橄榄油、香味水稻等.数字PCR技术以高灵敏性检验食品掺假类型,结合材料量、DNA量、基因拷贝数的线性关系判断掺假比重,该优势也是传统检测方法所不具备的.
四、结语
总而言之,数字PCR技术已在食品检测中得到了广泛运用,如：食源性致病微生物、转基因成分等.数字PCR技术有着较强的抑制性,能够研发不同数字PCR,一次检测只需2h即可对各靶标基因展开高通量检查.不过,目前该种检测方法成本投入高、试剂昂贵,相信随着科学技术的进步,数字PCR技术将得到进一步优化,提升检测效果,为人们提供健康、安全的食品,为人们身体健康保驾护航.
食品检测论文范文结:
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