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致羔羊腹泻大肠杆菌的分离鉴定
张希利1,赵万军2,晁旭东2,蒲新竹2,韩猛立3*,张宾3
（1.兵团第十师一八五团农业技术服务中心,新疆阿勒泰836700；2. 兵团第十师一八一团畜牧兽医
工作站；3.新疆农垦科学院畜牧兽医研究所）
收稿日期：２０16—01—09
*基金项目：新疆农垦科学院引导计划（72YYD201409）；兵团重大科技项目（2013AA03）.
*通讯作者：韩猛立（1980 - ）,男,助理研究员,主要从事动物传染病的诊断与防治研究.E-mail：hanmenglimm@163.com.
摘 要：本文针对一八五团规模化养殖场出现的以羔羊腹泻为主要症状的疾病,经过细菌分离鉴定、动物致病性试验、药敏试验等确定为大肠杆菌性腹泻,经药物治疗取得良好的控制效果.为避免类似疾病发生提供借鉴与参考.
关键词：羔羊腹泻；病原分离；大肠杆菌
一八五团位于阿尔泰山西南边缘的国境线上,额尔齐斯河流入北冰洋出境口处.西、北以阿拉克别克河为界与哈萨克斯坦共和国接壤；东至别列孜克河与哈巴河县为邻；南越过额尔齐斯河与吉木乃县交界.边境线长达86 km,被誉为“西北边境第一团”.属大陆性温带寒冷地区,冬季严寒而漫长,风多雪大；夏季短而炎热,蚊虫肆虐.自然条件恶劣.2014年,一八五团按照“稳中求进、改革创新、提质增效”的总要求,进一步优化农业结构,以提高农业现代化建设水平为重点,夯实农业发展基础,增强可持续发展能力；以职工多元增收为目标,形成提质增效,转变发展方式的倒逼机制,努力走出一条具有特色的生产技术先进、经营规模适度、市场竞争力强、生态环境可持续的新型农业现代化道路.
2014年师市财政拿出1 000万元鼓励发展畜牧养殖业,继续加强对畜牧业发展的扶持力度.一八五团也拿出相应的配套措施鼓励职工发展畜牧养殖业,改变以往的养殖模式和养殖品种,倡导引进多胎绵羊,进行规模化养殖.一八五团先后引进多胎羊10 000余只,修建现代化养殖圈舍10余座,使一八五团畜牧业迈上一个新的台阶.
2015年3月初阿勒泰地区出现了大雪和降温天气,一八五团养殖基地某养殖户的新生羔羊开始生病死亡.当地兽医用青霉素、链霉素等抗生素进行治疗,病情没有得到很好的控制,并慢慢开始在基地的羊群间传播开来,引起养殖户的恐慌.
1发病情况
2015年3月11日养殖基地张某家的羔羊开始出现痢疾症状,第2天陆续出现死亡病例,兽医技术人员建议应用双抗（即青、链霉素）进行治疗,效果不理想.随后开始在养殖基地慢慢传播开来,扩散到临近的几家羊群；发病率、死亡率逐渐上升；截至养殖户将死亡羊只带到兽医站进行诊断前,共死亡27只羔羊.
2临床症状
询问养殖户得知,发病初期羔羊体温升高,介于40.9 ~ 42.1 ℃之间,羔羊一般卧地不起,神情呆滞,眼结膜潮红,偶见神经症状,伴有游泳状运动,身体发抖,不想吃奶,口吐白沫,鼻液呈粘液状,拉灰白色或草绿色水样粪便,恶臭,肛门周围污浊不堪,后期可见粪便中带有血色,多数在发病2 ~ 3 d内死亡.
3剖检变化
对送来的羔羊进行剖检可见,尸体消瘦,可见黏膜苍白；胃、小肠、大肠内容物呈土,胃黏膜脱落；肠道充气、充血、出血；肠系膜淋巴结肿大充血；肝脏边缘顿圆、质脆、充血、色发黄；肺脏充血肿大；心包积液；肠黏膜上有溃疡或坏死灶；其它脏器变化不明显.
4病原分离鉴定
4.1无菌采集病变组织病料送检
革兰氏及美蓝染色,镜检,在肝、肠内容物等组织涂片中可见大量革兰氏阴性杆菌,偶见革兰氏阳性球菌；未见两级着色菌株.分别将心包液、肝、肠系膜淋巴结等组织分别接种于营养肉汤、普通培养基、5%绵羊血琼脂平板37 ℃培养18 ~ 24 h,可见肉汤明显浑浊、固体培养基上出现隆起、湿润、针尖大小灰白色菌落,未见溶血现象.
对上述液体培养基和固体培养基分别进行革兰氏染色镜检[1-2],可见非常单一的革兰氏阴性杆菌,偶见革兰氏阳性球菌.取革兰氏阴性的单个菌落分别接种于SS琼脂平板和麦康凯琼脂平板上,结果可见SS琼脂平板未见菌落出现,麦康凯琼脂平板上出现粉红色圆形菌落.
4.2生化鉴定
应用法国梅里埃 VITEK 2 Compact 细菌全自动微生物鉴定系统对分离菌株进行生化鉴定[3],结果为大肠杆菌.
4.3动物致病性试验
将分离菌株肉汤培养物按照0.2 mL接种于小白鼠腹腔,试验小鼠于接种后36 ~ 48 h陆续死亡,剖检可见具有败血症状.重复上述4.1、4.2操作,可见培养物特性与分离菌株结果相同.
4.4药敏试验
采用纸片扩散法做药敏试验[4]（细菌药敏纸片购自杭州天和微生物试剂有限公司）,结果显示对左氟沙星、新霉素、头孢噻呋、甲硝唑敏感,对卡拉霉素、庆大霉素、阿莫西林、土霉素、磺胺嘧啶具有耐药性.根据实际情况,选取低廉,效果好的药物,用于临床治疗.
5防治措施
（1）首先加强母羊饲养管理,同时选用环丙沙星、氧氟沙星等药物对假定健康羊只进行预防性治疗；发病羊只应用20%氟苯尼考肌肉注射,配合强心补液、消食健胃等方法连用3 ~ 5 d[5],1周后病情基本得到控制,未见新病例出现.（2）及时对圈舍进行消毒,不能长时间使用同一种消品,应交替使用；加强饲养管理,母羊围产期确保营养充足,使得胎儿发育良好,羔羊出生后能及时吃到母乳,注意脐带消毒；饲料营养搭配合理,营养全面,注意添加微量元素如舔砖；做好日常消毒工作,切实抓好圈舍清洁卫生；做好圈舍的日常通风和保暖工作.
6讨论
经过实验室诊断,结合发病羊只流行病学、临床症状、剖检变化,最终确诊为羔羊大肠杆菌性痢疾.（1）大肠杆菌是一种条件性致病菌,与外界环境、日常管理、饲料营养、气候突变等因素有密切关系.这次发病主要是因为前期天气突然变寒冷下雪引起；建议加强对母畜日常饲养管理,对圈舍定期消毒,做好通风保温工作,必要时可预先采取注射羔羊痢疾菌苗等综合性防治措施.（2）大肠杆菌可引起多种动物疾病,如羔羊痢疾、仔猪黄痢、仔猪白痢、仔猪水肿病、马引起幼驹大肠杆菌、禽大肠杆菌、犊牛白痢等,还可引起奶牛炎、子宫内膜炎.因此,应引起足够的重视,以免造成不必要的经济损失.（3）此次分离的病原菌只鉴定到种,未做血清型鉴定；剖检可见此次羔羊均出现不同程度的胃肠道鼓气现象,初步认为可能是由梭菌引起,但并未做相关的研究和鉴定工作,所有这些都有待于进一步明确.
参考文献
[1]陆承平. 兽医微生物学. 第四版[M].北京：中国农业出版社,2007.
[2]姚火春.兽医微生物学实验指导.第二版[M].北京：中国农业出版社,2007.
[3]贺晓龙,金珑.波尔羔羊腹泻的病原分离鉴定及综合性防治[J].黑龙江畜牧兽医,2006（8）：84-85.
[4]喻华英,王颜颜. 羔羊腹泻的细菌分离与鉴定[J].中国兽医杂志,2010,46（5）：43 - 45.
[5]李守江,韩猛立,胡鹏,等.杂交羔羊腹泻病原菌的分离鉴定与防治[J].新疆农垦科技,2014,37（9）：29 - 30.
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