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乳制品检测中酶联免疫吸附法的应用
近年来,酶联免疫吸附法得到了快速的发展,并且在临床医学、生物学和分析化学等领域得到了广泛的应用,理论分析的话,所有食品体系中的物质都可以被直接或者间接的当为抗原,然后利用ELISA进行分析和检测,但是理论与实际往往存在着差异,所以在实际检测的时候还需要考虑其它因素.
酶联免疫吸附法
ELISA的测定原理和方法.酶免疫方法的基本原理与其它免疫方法类似,都是利用抗原与抗体的结合为基础的,但是相比其它免疫方法,存在的差异包括：酶免疫法主要是用酶或者是辅助酶进行标记,对抗原或者抗体进行相应的标记,另外,酶还能在一定的程度上发达了免疫反应,使实验结果的观察更加方便.ELISA也是如此,ELISA最大的特点就是将聚苯乙烯微量反应板吸附抗原或者扰体,让它们发生固化,进一步发生免疫反应或者是酶促反应.
ELISA的方法和操作.目前,ELISA的具体操作方法有三种,分别是：
（1）测定抗体的间接法；
（2）测定抗原的双抗体夹心法；
（3）测定抗原的竞争法.不同的测定方法有各自的特点和优势,在实际测定的时候操作人员需要根据实际情况选择相应的操作方法,从而保证测定的准确性.
ELISA在乳制品检测的应用
检测免疫球蛋白.免疫球蛋白是一类具有抗体(Ab)括性且能与相应抗原发生特异性结合的球蛋白,是人体中一种重要的免疫因子,它不仅能够增强人体的防御能力,而且能杀死进入人体的细菌和病毒,是人体正常运行的基础和保障.人乳中的Ig含量比牛乳中的Ig高,近年来,研究人员将Ig用作食品添加剂生产保健食品,如婴儿配方奶粉、乳珍等.常规的蛋白质分析方法无法检测Ig的含量和活性,但大量的研究表明：应用ELISA可以成功的解决这个询题.吴定等建立ELISA测定母乳化乳粉中的Ig的含量,结果比较理想.
检测乳铁蛋白.乳铁蛋白也是体液中一种具有多项生理活性的免疫因子,其主要是完成体内抗菌以及肠胃中微生物数量的控制作用,从而有效的促进人体对铁元素的吸收,并控制铁催化的抗氧作用,是人体内不可或缺的一项重要免疫因子.乳铁蛋白在婴儿配方奶粉以及其他保健乳粉中是不可缺少的,但是如何确定其活性,就需要对乳铁蛋白进行检测.张英华等应用ELISA检测乳铁蛋白的含量,最小检出量为0.5mg/ml,线性范围0.8~100ng/ml,相比目前常规的色谱检测法有更快的检测速度以及更简便的检测过程.
检测乳制品中的残留农药.在传统的农药分析过程中,需要对农药进行提取、净化,然后进行相应的色谱测定,整个过程是比较复杂的,而且操作难度较大,其在乳制品中残留农药的检测中也有了广泛的应用,ELISA可以在短时间内完成残留农药的测定,而且整个过程自动化程度高,无需人工进行操作,测定结果准确度高.吴定以牛血清蛋白和卵蛋白两种不同的载体包被抗原,建立牛乳中磺胺嘧啶ELISA测定.
检测乳制品中的毒素.乳制品中还有可能包含一些有毒的物质,包括黄曲霉毒素,黄曲霉毒素是一种致毒性和致癌性很强的毒素,其对人体的危害相当大,所以严格的控制乳制品中黄曲霉毒素的含量是很有必要的.黄曲霉毒素M1是由乳牛食用了黄曲霉毒素污染的饲料而引起的,乳制品中的AFTM1含量很低,一般为几十ppt到几百ppt,常规分析技术难以准确测定其含量.有研究用ELISA检测AFTM1的残留量,结果表明,当浓度大于30ppt时,ELISA比高效液相色谱的精确度和准确度高.
检测乳制品中的微生物.乳制品检测过程是比较复杂的、繁琐的,首先需要将微生物与乳制品进行分离,然后对其进行培养等,最后才能对其进行检测,整个过程工作量大,而且需要消耗大量的时间,所以说如何缩短微生物检测周期,并提高检测效率成为当前急需解决的问题.ELISA的出现有效的解决了这一问题,乳制品中都会储存丰富的营养物质,这些营养物质对微生物的成长发育有很大的帮助,所以说直接在乳制品样品中进行微生物的培养能有效的缩短微生物的培养周期.田银芳等建立了沙门氏菌的直接ELISA方法,检测350份鲜牛奶样品中的沙门氏菌.通过试验最终发现,直接EILSA的敏感度和特异性都达到满意的效果,而且微生物的分析时间有了很大的缩短,只需要2~3d.
综上所述,ELISA相比其它检测方法,其在乳制品检测中的应用更有优势,包括高灵敏度、准确性、成本低、可以批量处理等等,由此可见,ELISA在乳制品检测中还是有很大的应用前景的,我们需要做的就是不断的对该技术进行完善和创新,从而有效的保证ELISA在乳制品检测中的广泛应用.
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