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中草药浸出液体外驱杀两种水产致病性盾纤虫
中草药浸出液体外驱杀两种水产
致病性盾纤虫的研究
林能锋1 郑晨艳2 王侯杰2 曾 红2*
（1.福建省农业科学院生物技术研究所 福州 350003；
2.福建师范大学生命科学学院 福州 350108）
摘 要 水滴伪康纤虫和海洋尾丝虫是严重危害海水养殖鱼类的兼性寄生纤毛虫,中草药在水产寄生虫病的防治中有着广泛的应用,具有无药物残留,无污染等优点.应用10种常见中草药浸出液对两种盾纤虫的体外驱杀效果的研究表明,水滴伪康纤虫对首乌藤、大黄和辣椒的敏感度较高,在药物浓度为0.5 g/L时,驱虫率分别为0.85、0.59和0.59,与空白对照组对比差异极显著（P<0.01）；而海洋尾丝虫则对石榴皮、贯众、首乌藤和辣椒表现出了较高的敏感度,在药物浓度为0.5 g/L时,驱虫率分别为0.55、0.51、0.43和0.37,与空白对照组相比差异极显著（P<0.01）.马鞭草、槟榔、虎杖、连翘、地榆等几味药物对两种盾纤虫的驱杀效果则不明显.试验结果提示,首乌藤和辣椒两种中草药浸出液在体外均表现出了对两种盾纤虫较好的驱虫效果,同时不同药物的驱杀效果差异也表明两种盾纤虫对药物的反应机制可能存在着一定的差异.
关键词 水滴伪康纤虫 海洋尾丝虫 中草药浸出液 驱虫率
文献标识码：A
文章编号：1003-4331（2017）05-0013-03
Repellent effect of chinese herbal leachate to two species of scuticociliate in vitro
Lin Nengfeng1 Zheng Chenyan2 Wang Houjie2 Zeng Hong 2*
(1.Institute of Biotechnology, Fujian Academy of Agriculture Science, Fuzhou 350003;
2.College of Life Science, Fujian Normal University, Fuzhou 350108)
Abstract Pseudocohnilembus persalinus and Uronema marinum could cause severe mortalities in cultured marine fishes. They had been recognized as facultative parasites. Chinese medicinal herb has been widely used in the prevention of aquatic parasitic disease in China. The present study screened 10 candidate chinese herbal medicines for repellent effect to these pathogens in vitro. Leachate of caulis polygoni multiflori, rhubarb and pepper (concentration 0.5 g/L,within a 30 min assay period) had significant repellent effect to P.persalinus compared with the blank control group(P<0.01). The anthelmintic rates were 0.85, 0.59 and 0.59, respectively. U.marinum shows high sensitivity to pomegranate peel, Cyrtomium fortunei, caulis polygoni multiflori and pepper compared with the blank control group (P<0.01), the anthelmintic rates were 0.55, 0.51, 0.43 and 0.37, respectively. But some herbs such as verbena, areca, polygonum, forsythia, Radix sanguisorbae showed less effectiveness to these two kinds of scuticociliates in vitro. Leach liquor of caulis polygoni multiflori and pepper had direct influence to the scuticociliates in vitro, while other candidate herbs also had repellent effect to the parasites and had other indirect effect to the fish. In view of these findings, we discuss the potential utility of chinese medicinal herbs as a strategy for the control of scuticociliatosis in marine fish farms.
Key words Pseudocohnilembus persalinus Uronema marinum Chinese medicinal herb Anthelmintic rate
规模化网箱和工厂化养殖方式已逐渐成为我国海洋鱼类养殖的主要模式,但由于养殖技术和管理水平还不够成熟,也带来很多病害问题.其中纤毛类寄生虫是造成海水养殖鱼类损失的一类重要寄生性病害生物.在牙鲆、大菱鲆、红鳍东方鲀等海水养 殖鱼类中,盾纤类纤毛虫病带来的危害越来越严 重[1-2].
水滴伪康纤虫（Pseudocohnilemus persalinus）、海洋尾丝虫（Uronema marinum）同属盾纤目（Scuticociliatida）.可自由生活于各种养殖和育苗水体中,一旦入侵鱼体就会快速繁殖,刺激鱼类表皮产生黏液,受感染鱼体表颜色变暗,摄食量减少,鳃盖内侧发红、溃烂,皮肤和皮下肌肉出现坏死性溃疡,肠道松弛、扩张,病情严重的鱼肝脏还有出血现象[3-5].盾纤毛虫喜好聚集在细菌菌群丰富的部位,因此,常常表现出细菌感染并发的症状[3].鱼群患病后,死亡率高,危害严重.有报道称,严重时,网箱养殖红鳍东方鲀暴发海洋尾丝虫病时,死亡率可高达60%~80%[5].
在水产寄生性纤毛虫病防治中,化学合成药物和中草药的使用是最常见的手段.化学合成药物作用直接、快速,Iglesias R等[6]筛选了52种抗原虫类的化学药物,发现有13种对离体的盾纤虫Philasterides dicentrarchi有效,但有一些化学合成药物在水产中禁止使用,且可能存在药物残留和药物毒害等问题却未加以探讨.国内在生产上对盾纤类纤毛虫病主要使用如过氧化氢、等外用消毒剂进行药浴处理[7].中草药具有毒副作用小、不易产生耐药、无药物残留超标、成本低等优势,在水产病害防治中得到广泛应用.一些研究者发现,辣椒、生姜、槟榔、苦楝等中草药对防治几种常见的水产病害纤毛虫等有着较好的杀灭效果[8-11].
本文用10种常见的中草药浸出液对水滴伪康纤虫和海洋尾丝虫的体外驱虫效果进行了探讨,为水产养殖业者在临床防治盾纤虫病提供参考.
1 材料与方法
1.1 水滴伪康纤虫和海洋尾丝虫 两种盾纤虫由中国海洋大学原生动物试验室惠赠,利用虾肉发酵培养基进行保种和传代培养.进行趋化性测试的虫体培养密度大于5 000 ind/mL.
1.2 中草药浸出液样品制备 马鞭草、地榆、连翘、马齿苋、石榴皮、贯众、大黄、槟榔、虎杖、首乌藤、辣椒等中草药购自福州回店.
中草药测试液：依据闫茂仓（2010）方法[12],将药材称2 g（药草体积较大的先用研钵研碎）在纯水中浸泡2 h,然后进行煮沸,沸腾持续10 min后用四层纱布把药草渣滤出,药液保存备用；在药草渣中加入纯水再进行与上一步煮沸相同过程,混合两次药液进行浓缩,浓缩至40 mL原液,使生药含量为
50 g/L,4 ℃保存备用.使用时,取中药原液100 μL用经过滤煮沸海水稀释至5 mL.
1.3 驱虫率测试方法 将10 μL虫体培养液和 10 μL中草药液混合后滴在有计数方格的干净载玻片一端,载玻片另一端滴加20 μL海水液滴,液滴间距2 cm.用干净的牙签从海水液滴端向加入虫体的液滴端轻轻划出一条细的通道,使两端液滴连通,趋化反应进行30 min,重复试验4次.对照组以海水替换中草药测试液.驱虫率（Anthelmintic rate）计算方法如下：A.R.等于游向另一端的虫体数/虫体总数.
1.4 数据处理 试验数据用Microsoft Excel软件进行统计学差异显著性分析（成对双样本T检验）处理,分别用P>0.05、0.01<P<0.05、P<0.01来表示差异不显著、差异显著和差异极显著.
2 结 果
2.1 11种中草药浸出液对水滴伪康纤虫的驱虫效果 测试结果表明（见图1）,首乌藤、大黄、辣椒的浸出液（0.5 g/L）对水滴伪康纤虫具有明显的驱虫效果,其驱虫率分别为0.85、0.59和0.59,且与以海水测试液的对照组比较,驱虫效果差异极显著（P<0.01）.而马鞭草、地榆、槟榔等对水滴伪康纤虫的驱虫效果并不明显.
2.2 10种中草药浸出液对海洋尾丝虫的驱虫效果 试验结果表明（见图2）,海洋尾丝虫对所测试的中草药浸出液反应的敏感性有较大的差异,在10种浓度为0.5 g/L的中草药测试液中,石榴皮、贯众、首乌藤、辣椒测试液对海洋尾丝虫有较好的驱虫效果,而海洋尾丝虫对马鞭草、大黄、槟榔等测试液的敏感性较低.在显著性分析中,石榴皮、贯众、辣椒浸出液组的驱虫效果极显著（P＜0.01）高于空白对照组,连翘、马齿苋、虎杖、首乌藤浸出液组表现为显著（0.01＜P＜0.05）.
3 讨 论
中草药具有便宜、来源广泛、副作用相较化学试剂小、不易产生抗性等优点,已被广泛应用于水产养殖的病害预防治疗中,宿斌等[13]应用复方中草药蒿芩驱虫散（由槟榔、青蒿、川楝子等组成）拌料口服防治大菱鲆盾纤虫病取得较好的效果,但对中草药体外驱杀盾纤虫效果的研究并未见报道.
本研究参考有关中草药防治鱼类病害及中草药浸出液制备方法的资料,选择常见、易得的中草药物设计实施本试验.
通过本次试验,发现大黄、首乌藤、辣椒等对水滴伪康纤虫的驱虫效果极显著高于海水对照组.而海洋尾丝虫则对石榴皮、贯众、首乌藤、辣椒等浸出液表现极为敏感.邹峰等[14]对刺激隐核虫幼虫的趋化性研究中发现,刺激隐核虫幼虫对五倍子、贯众、槟榔、大黄、虎杖、苦楝等6种中草药的趋化率极显著（P<0.01）低于海水对照组.国内研究者在用中草药浸出液杀灭刺激隐核虫的试验中发现,辣椒和槟榔的杀虫效果最好,同时对其包囊也有一定的杀灭效果[15-16].比较发现,不同种类的纤毛虫对于药物的敏感性有较大的区别,但辣椒则显示出对几种病害纤毛虫都有较好的驱杀效果,可能与辣椒中含有能够对虫体产生强烈刺激的辣椒素这种驱虫有效成分有关,其对纤毛虫的驱杀机理还有待进一步研究.
在对两种盾纤类纤毛虫的驱杀试验结果中,一些药物如首乌藤、连翘都富含黄酮类的抑菌成分,虎杖富含蒽醌类抑菌成分,石榴皮含有鞣质、生物碱等驱虫、抑菌的有效成分,上述这些中草药也在本试验中得到较显著的驱虫效果.而鱼类感染盾纤虫病例大多伴随着细菌感染,因此,将上述中草药与其它药物进行配伍,对抑制继发性细菌感染、防治鱼类盾纤虫病有可能获得更好的效果.
参考文献：
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中草药论文范文结:
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