毕业论文网
本文关于饲料论文范文,可以做为相关论文参考文献,与写作提纲思路参考。
荧光分光光度法测定饲料中二氢吡啶的含量
二氢吡啶是一种非营养性饲料添加剂,现已取代成为国内最常使用的饲料添加剂[1].研究表明,二氢吡啶具有促进猪、鸡、牛、羊、鱼的生长,改善畜禽和鱼产品品质,提高猪、牛、羊、兔的繁殖性能及防病多种功能.所以,有必要对饲料中的二氢吡啶的含量加以控制.目前,测定饲料中二氢吡啶含量的方法主要有紫外分光光度法、高效液相色谱法等[2].但紫外分光光度法灵敏度低,特异性低,检测结果不准确；高效液相色谱法操作繁琐,分析时间长,不利于快速分析[3].二氢吡啶天然具有荧光,但目前尚未利用荧光分光光度法测定二氢吡啶的含量[4].所以,本实验拟采用荧光分光光度法建立饲料中二氢吡啶含量的测定方法,并运用于质量控制[5].
1 实验部分
1.1 仪器与试剂
RF-5301PC 型荧光分光光度计,岛津-GL 通用仪器有限责任公司；KQ-300DA 型数控超声波清洗器,昆山市超声仪器有限公司；电子天平XS205,Mettler Toledo.二氢吡啶对照品,中国药品生物制品检定研究院,批号170322,纯度为99.0%；氢氧化钠、磷酸、甲酸,均为分析纯；饲料从多个兽药店采集,水为蒸馏水.
1.2 溶液的制备
1.2.1 对照品溶液
精密称取二氢吡啶对照品15.20 mg,置于100 mL棕色容量瓶中,加1% 磷酸乙腈适量超声溶解,定容至刻度,作为对照品储备溶液.精密移取储备液1 mL置于100 mL 棕色容量瓶中,加1% 磷酸乙腈定容至刻度,即得浓度约为1 μg/mL 的对照品使用溶液[6].
1.2.2 供试品溶液
取饲料100 g 研细,混合均匀,精确称取10 g,置于100 mL 棕色容量瓶中,加入1% 磷酸乙腈溶液60 mL,0 ℃水浴超声20 min,取出,用1% 磷酸乙腈溶液定容至刻度,摇匀.13 000 r/min 离心5 min,移取上清液1 mL,置于50 mL 棕色容量瓶中,加入1%磷酸乙腈溶液定容至刻度,摇匀,0.45 μm 滤膜过滤,即得.
2 结果与讨论
2.1 标准曲线的绘制
准确移取1.2.1 中制得的对照品使用溶液0.50、1.00、2.00、5.00、10.00 mL,分别置于10 mL 棕色容量瓶中,加入1% 磷酸乙腈溶液稀释至刻度,摇匀,得到浓度依次为0.05、0.10、0.20、0.50、1.00 μg/mL对照品溶液（L1-L5）.以1%磷酸乙腈溶液为空白溶剂,在Ex 363 nm、Em 448 nm 下测定其吸光度[7].以吸光度A 为纵坐标、浓度c 为横坐标绘制曲线,计算回归方程为A等于545.9c+54.8,r等于0.997 0.结果表明,二氢吡啶在0.05 ～ 1.00 μg/mL 浓度范围内呈良好的线性关系.
2.2 测定波长的选择
准确移取1.2.1 中制得的二氢吡啶对照品使用溶液适量,以1% 磷酸乙腈溶液为空白溶剂,将对照品溶液在激发波长220 ～ 400 nm、发射波长400 ～ 600 nm进行扫描,结果如图1 所示.由图1 可知,其最大激发波长为363 nm,最大发射波长为448 nm.
2.3 空白溶液的紫外光谱
配制1% 磷酸乙腈溶液, 按2.2 项测定, 结果如图2 所示.由图可知,空白溶剂在最大激发波长363 nm、最大发射波长为448 nm 处无明显吸收.
2.4 精密度实验
移取2.1 项下二氢吡啶对照品溶液L3 适量,于Ex 233 nm、Em 464 nm 下测定吸光度, 重复6 次,测得荧光强度,计算得RSD 为0.61%,表明仪器精密度良好.
2.5 重复性实验
精确称取2 号饲料10 g,6 份,置于100 mL 棕色容量瓶中,按1.2.2 中的供试品溶液的制备项处理,测定,计算含量,结果6 份测定值RSD 为3.75%.
2.6 检测限
取1% 磷酸乙腈溶液适量, 在Ex 233 nm、Em464 nm 下测定荧光强度,重复11 次,计算SD.按公式（1）计算该方法的检测限.
LOD等于3SD/k （1）
式（1）中,k 为标曲的斜率.计算得检测限LOD为0.013 μg/mL.
2.7 稳定性考察
精确称取2 号饲料10 g,3 份,置于100 mL 棕色容量瓶中,按1.2.2 中的供试品溶液的制备项处理,分别于0m、20、40、60、120 min 测定其荧光强度,计算RSD[8].结果发现均小于2%,说明该对照品溶液2 h 内基本稳定,不影响含量测定.
2.8 回收率实验
精确称取2 号饲料5 g,6 份, 置于100 mL 棕色容量瓶中,再分别加入二氢吡啶对照品储备溶液0.5 mL,按1.2.2 中的供试品溶液的制备项处理,测定其荧光强度,计算回收率,结果见表2.
2.9 样品测定
移取1.2.2 项下供试品溶液适量,以1% 磷酸乙腈溶液为空白溶剂,在Ex 233 nm、Em 464 nm 下测定荧光强度,重复测定3 次,取平均值,计算其含量,结果见表3.
3 结果与讨论
3.1 提取溶剂的选择
二氢吡啶微溶于水,能溶于热乙醇、乙腈[9].所以,本实验选择乙腈为提取溶剂[10].本实验考察了二氢吡啶的1% 甲酸乙腈、1% 磷酸乙腈、1% 氢氧化钠乙腈溶液的荧光强度,发现：1%甲酸乙腈会导致荧光淬灭,1%磷酸乙腈和1%氢氧化钠乙腈溶液的荧光强度接近.考虑到化合物的稳定性,最终采用1% 磷酸乙腈作为样品提取溶剂.
3.2 检测波长的确定
本实验分别扫描了二氢吡啶1% 磷酸乙腈溶液及空白溶剂的荧光激发和发射光谱,二氢吡啶的最大紫外吸收波长为230 nm、363 nm 处,最大发射波长为448 nm.考虑溶剂干扰,确定了最大激发波长为363 nm、发射波长448 nm,作为定量测定波长.
3.3 方法的优势
二氢吡啶作为普遍使用的饲料添加剂,一般的添加比例为0.01% ～ 0.02%,现有测定方法主要是紫外分光光度法,灵敏度低,难以满足饲料的测定要求[11].二氢吡啶天然具有荧光,利用荧光分光光度法测定可以取得更低的检测限,达到检测饲料中微量添加二氢吡啶的要求.
4 结语
采用荧光分光光度法测定饲料中二氢吡啶的含量,方法简便快捷,数据可靠准确,可作为饲料中二氢吡啶含量的测定方法.
饲料论文范文结:
关于饲料方面的论文题目、论文提纲、饲料论文开题报告、文献综述、参考文献的相关大学硕士和本科毕业论文。