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人嗜血支原体瑞士染色光镜下的形态特点
刘寰宇 陈 瑶 邰秀珍 杨殿相
内蒙古医科大学基础医学院病理生理学教研室 内蒙古自治区呼和浩特市 010000
【摘 要】目的：观察人嗜血支原体光学显微镜下的的形态特点,从而快速、准确的初步诊断人嗜血支原体病.方法：人血涂片、瑞士染色、自然干燥,光学显微镜1000x 油镜下观察.结果：见大小不一、形态多样、颜色多色的人嗜血支原体.结论：人嗜血支原体具有多色性、多形性、折光性等特点.
【关键词】人嗜血支原体；形态；光镜；瑞士染色
人嗜血支原体又称人附红细胞体是寄生于人或多种动物的红细胞表面、血浆、组织液及脑脊髓液中的的一群血液寄生微生物[1-2],其大小波动较大[3],生物学分类尚且存在争议.能引起以贫血、黄疸、发热为主要临床特征的人嗜血支原体病[3].自1986 年人嗜血支原体病首次被报道至今,有很多关于光镜下人嗜血支原体瑞士染色特点的描述,但关于人嗜血支原体形态的相关图像资料较少,本文描述了在筛选人嗜血支原体重度感染患者过程中见到的6 张光镜下瑞士染色的人嗜血支原体图片.
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 研究对象
人嗜血支原体感染患者血液来源于内蒙古医科大学第二附属医院入院的患者,不区分年龄、性别.
1.1.2 主要试剂和药品
瑞氏染粉,磷酸二氢钾,磷酸氢二钠,甘油,KCl,NaCl,Na2HP04,KH2P04,EDTA.
1.1.3 主要试剂的配制
瑞氏染液配制：
（1）瑞氏染液
瑞氏染粉1.2g, 甘油80ml, 甲醇600ml,瑞氏染粉加入研钵,研细（一般5 ～ 10min）,缓慢加入甘油,最后再加入甲醇600ml（存放3 个月）,放置4 度冰箱中备用.
（2）缓冲液（放置于4 度冰箱保存可同时用封口膜封住）
1% 磷酸二氢钾（KH2PO4）30ml,1%磷酸氢二钠（Na2HPO4）20ml,加蒸馏水加至1000ml,PH:6.4-6.8.
1.4 主要实验仪器
分析天平,电子显微镜,图像输出软件,电热恒温鼓风培养箱,4℃冰箱,微量移液器,全自动高压灭菌锅,载玻片,洗耳球,染色架,计时器
1.2 实验方法
瑞氏染色
血涂片平置于染色架上,根据血膜大小滴加适量瑞氏染液,一般3 ～ 5 滴,使其迅速盖满血膜,再加染液一倍量的缓冲液,用洗耳球对准血涂片,使染液与缓冲液充分混合,染色10min,以固定血片.水洗30 秒,待自然干燥后镜检.
2 结果
取人嗜血支原体瑞士染色血涂片,在1000x 油镜下观察结果如下.
图1 显示：
（1）血浆中可见大小不一的、点状、有较强折光性的人嗜血支原体.
（2）被人嗜血支原体附着的红细胞边缘破碎呈齿轮状、缺口状.
（3）图中左侧一红细胞被成熟人嗜血支原体感染后变型成S 形,寄生的人嗜血支原体表现出明显的折光性.
图2 显示：
（1）图中血浆中、红细胞上均可见到人嗜血支原体附着,大小均一的人嗜血支原体寄生在同一红细胞边缘后使红细胞变成向日葵状,具有弱折光.
（2）图片左侧血浆中有一较大的圆形、强折光性的人嗜血支原体.
（3）图中可见一个深蓝色、一个棕褐色人嗜血支原体分别寄生在不同的红细胞表面.
图3 显示：
（1）多个人嗜血支原体同时寄生在部分红细胞表面,使红细胞变型成星芒状.
（2）血浆中可见聚集成链状的人嗜血支原体.
图4 显示：
（1）多个棕褐色的人嗜血支原体分别寄生在不同红细胞表面.图的右上角有一个蓝色的人嗜血支原体寄生在红细胞表面.也可见两个嗜血支原体附着在同一个红细胞表面.
（2）人嗜血支原体感染后红细胞淡染区空泡化.
（3）一个异型淋巴细胞上未见人嗜血支原体附着.
（4）图片右侧有一体积较大的杂质,调焦后无折光性.
图5 显示：
（1）图为一人嗜血支原体严重感染图片,多个嗜血支原体同时寄生在一个红细胞表面且表现出较强的折光性.
（2）人嗜血支原体感染严重红细胞出现黏连、重叠.
（3）部分红细胞淡染区空泡化.
图6 显示：
（1）图中可见多个被人嗜血支原体感染后缩小的红细胞.
（2）图中可见多个深染的红细胞.
3 结论
人嗜血支原体血涂片经瑞氏染色在1000x 油镜下观察,可见人嗜血支原体大小不一,直径一般在0.3-1.2μm.呈圆、卵圆、短杆、拉链、线团、x、y、w 形等不规则的多形性.其着色可见紫红色、褐、褐绿色、深褐色、蓝色、绿色等多色性,与邰秀珍[3]、石全贵等的报道一致.被寄生的红细胞大小发生变化,差距悬殊,感染严重时变形呈星芒状,甚至溶解破碎.颜色深浅不一可见多染性、高色性红细胞.
人嗜血支原体大小的不同、可能与它们处在不同生活史、不同阶段有关.形态的不同与人的免疫状态有关.着色的不同,可能与染色时给与的条件如室内温度、室内湿度、染液的质量、涂好血片后染色是否及时、所用图像输软件的设置有关.折光性是辨别人嗜血支原体与其它微生物以及易混杂因素的主要特征.现阶段感染率的高低主要根据被人嗜血支原体寄生的红细胞的数目来确定而本文认为感染的严重程度应同时考虑每个红细胞上寄生的人嗜血支原体的个数, 血浆中附红细胞体的个数,如果每个红细胞上寄生的人嗜血支原体的个数越多,其感染情况越严重这与本文中报道的严重感染的人嗜血支原体患者的血片相符.图片中见到的两个或多个红细胞聚集的现象可能是由于人嗜血支原体分泌粘附因子引起的.红细胞淡染区的空泡化可能是由于巨形人嗜血支原体附着引起.除此之外,图片中性粒细胞和淋巴细胞偶有人嗜血支原体寄生与邰秀珍、石全贵[4] 等的报道不一致.由于人嗜血支原体形态的多形性和颜色的多样性、折光性的特点给人嗜血支原体的客观诊断带来障碍,因此人嗜血支原体的分子生物学诊断尤为重要,将在以后的实验过程予以关注.
（通讯作者：陈瑶）
参考文献
[1] 邰秀珍. 人类附红细胞体病[J]. 内蒙古医学杂志,1991(01)( 增刊):122.
[2] 冯立明,路英杰．人类附红细胞体病[J]. 中华血液学杂志,1992,13(10):520-522．
[3] 邰秀珍, 杨殿相, 秦林金, 金丽萍,托娅, 齐国良. 人类附红细胞体形态学特点[J]. 中国共患病杂志,1998(05):83-84+86.
[4] 石泉贵, 李素芝, 陈洪章. 高原人附红细胞体病的诊断与防治[J]. 华南国防医学杂志,2011,25(06):466-468.
作者简介
刘寰宇（1990-）,女,在读硕士.
通讯作者简介
陈瑶（1957-）女,现为内蒙古医科大学基础医学院病理生理学教研室教授,主要从事心血管病理生理学研究.
染色论文范文结:
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